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ELISA试剂盒样本处理及要求
点击次数:233 发布时间:2018-08-28
   ELISA试剂盒样本处理及要求
   ELISA试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本,供应的种属有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊 、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。
   ELISA试剂盒可用于测定抗体,也可用于检测杭原。其基本原理是采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。3种必要的试 剂:①固相的抗原或抗体(免疫吸附剂);②酶标记的抗原或抗体(标记物);③酶作用的底物(显色剂)。
   ELISA试剂盒过程包括:抗原吸附在固相载体上,这个过程称为包被,加待测抗体,再加相应酶标记抗体,生成抗原--待测抗体--酶标记抗体的复合物,再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收 计算抗体的量。
   ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 大鼠叶酸(FA)水平。用纯化的大鼠叶酸(FA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入大鼠叶酸(FA),再与HRP标记的 大鼠叶酸(FA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠叶酸(FA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中 大鼠叶酸(FA)浓度。
   样本处理及要求:
   1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
   2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
   3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
   4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。ELISA试剂盒保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
   5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
   6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
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手机
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